國藥中生武招字第（2017）057號
招標內容：武漢生物制品研究所有限責任公司脊髓灰質炎（sabin株）單克隆抗體制備服務
1.目的
課題《sIPV的II型病毒抗原定量檢測試劑盒研制》需要訂制一株能夠區分識別sIPV的I型、II型、III型病毒的C抗原和D抗原的單克隆抗體（最好抗體具有中和活性）.
2.范圍
僅用于武漢生物制品研究所有限責任公司sIPV的II型病毒D抗原單克隆抗體訂制服務。
3.內容
3.1合格的投標人必須具備以下條件：
3.1.1、符合《中華人民共和國政府采購法》第二十二條規定的供應商。
3.2、具有病毒類疫苗單抗制作經驗
3.2.1公司單抗制備需有5年以上單抗制備經驗
3.2.2項目負責人需具備5年以上抗體藥物研發管理經歷
3.2.3 抗體藥物研發團隊不少于30人
3.2.4 具有抗體高通量自動化篩選平臺
4、其他資質要求：
4.1本次招標不接受聯合投標。
4.2本項目面向大、中、小等各類供應商采購，但不接受轉包公司提供的服務。
4.3具有合法經營資質和認證認可資質。
4.4近3年無繳納稅收和社會保障資金的不良記錄，有良好的商業信譽和較強的經濟能力。
4.5具有完善的質量管理體系及突發事件應急預案。
5、項目概況：
5.1、項目名稱：武漢生物制品研究所脊髓灰質炎病毒（sabin株II型病毒）單克隆抗體制備服務
5.2、招標類型：脊髓灰質炎單抗定制合同，長期有效
5.3、項目主要流程、要求：
5.3.1服務流程：
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階段 |
內容 |
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１．免疫程序(大約75天左右) |
Ｔ－１：預取血５-８只Balb/c純系小鼠。
Ｔ＋０：初免，10-100ug（完全佐劑），皮下多點注射。
Ｔ＋21：加強１，10-100ug（非完全佐劑），皮下多點注射。
Ｔ＋42：加強２，10-100ug（非完全佐劑），皮下多點注射。
Ｔ＋52：試取血，ELISA檢測滴度取滴度較高的小鼠。
Ｔ＋72：終加強，10-100ug（非完全佐劑），尾靜脈注射。 |
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２．融合： |
免疫75天后（終免疫３天后）的鼠脾細胞和SP2/0骨髓瘤細胞融合。 |
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３．篩選陽性細胞克隆：(大約10-20天) |
融合后10-20天，經2-3次篩選，包括自身抗原的陽性篩選和交叉抗原的陰性篩選。 |
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４．克隆化及檢測：(大約10-20天) |
篩選后，兩次亞克隆，同時進行檢測。 |
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５．腹水方式制備單克隆抗體：(10-20天) |
選取多株，分別免疫兩只BALB/c小鼠提取2ml以上腹水。 |
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６．抗體純化：(大約7天) |
腹水經辛酸和硫酸銨兩步純化。 |
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說明: |
1: 免疫5－8只 Balb/c純系小鼠。
2:選取高滴度免疫小鼠取脾細胞與骨髓瘤細胞融合。
3: 提供盡可能多的細胞克隆，并保證至少有3株是針對目的抗原的細胞株，但不能保證你們用該株細胞的抗體的后續開發的結果。
4: 提供多株（至少3株）單克隆細胞上清≥1ml/株，腹水≥2 ml/株。
5: 腹水純化后抗體ELISA效價≥1：20，000。
6:客戶提供抗原,抗原純度90%以上。
7: 所有的細胞株（包括特異及非特異的細胞株） 及抗體的知識產權歸武漢生物制片研究所所有。
9:所有研究過程中產生的細胞株、抗體及文件要交付武漢生物制品研究所有限責任公司。
10; 其他事宜,雙方進行協商。 |
5.3.2具體雜交瘤細胞的篩選，亞克隆及鑒定的要求：
5.3.2.1雜交瘤細胞的篩選和亞克隆的要求
加 HAT 培養基于 96 孔板培養 。融合后細胞長滿 1 3 ～ 2 3 孔時 ,取培養上清采用間接ELISA 法，間接免疫熒光法 2 種方法對雜交瘤細胞進行篩選（直接用 Elisa（鋪4塊板子）先區分D和C ，再用間接免疫熒光法篩選），檢測其與 D 、C 抗原的反應性,選取與 D 抗原反應而與 C 抗原不反應的陽性孔雜交瘤細胞孔，并采用有限稀釋法對細胞進行 3 次亞克隆。
進一步以 Balb c 小鼠腹腔巨噬細胞為飼養細胞進行亞克隆。經過至少 3 次有限稀釋獲得均一陽性克隆。將克隆純化的雜交瘤細胞擴大培養,調整細胞數 1 ×106 ～ 2 ×106/ mL, 取 1 mL 細胞懸液注入經液體石蠟預處理 2 周的 Balb/c 小鼠腹腔內,收集腹水, -20 ℃保存。
5.3.2.2鑒定的要求
5.3.2.2.1腹水的鑒定
腹水抗體效價檢測 ELISA 測得抗體效價，中和抗體效價，抗體亞型和蛋白總質量濃度。
腹水特異性鑒定 腹水抗體與Ⅱ型Sabin 株C 抗原和 Ⅰ 、Ⅲ型 Sabin 株病毒 C、D 抗原不發生交叉反應
5.3.2.2.2抗體的鑒定
間接 ELISA 法和微量中和實驗檢測抗體效價；用Ⅰ型、Ⅱ型 、Ⅲ型 Sabin 株抗體包被 , 加 Sabin IPV 抗原(Ⅰ 、Ⅱ、Ⅲ型 D 抗原 ,Ⅱ型C 抗原),進行 ELISA 檢測抗原抗體反應性; 秋水仙素阻抑法分析雜交瘤細胞染色體; ELISA檢測抗體亞型; BCA 法測量蛋白含量。
5.3.3 最終得到單抗的要求
最后得到單克隆抗體 ,只與脊灰病毒Ⅱ型 Sabin 株 D 抗原發生反應, 與脊灰病毒 Ⅱ型Sabin 株 C 抗原 , Ⅰ型 Sabin 株 D 抗原和C抗原 , Ⅲ型 Pfizer 株D 抗原和C抗原無交叉反應
5.4.融合后的篩選，武漢生物制品研究所有限責任公司可以派人員參與。
5.5.交付日期
項目簽訂后4個月內完成交付達到要求的單克隆抗體。
5.6．單克隆抗體細胞株及抗體知識產權屬于武漢生物制品研究所有限責任公司
6.1報名截止日期：2017年06月09 日下午3:30時
6.2報名資質：投標人持公司營業執照（副本）、行業許可證、法人委托書、代理人身份證前來報名。
6.3此項目評標標準是以低價優先原則做為商務部分評選基礎，通過評委綜合評選后確定中標推薦人。
6.4投標書需準備3份，一正二副，所有投標方制作標書中必須加入反商業賄賂承諾書。否則視為無效標書。
反商業賄賂承諾書.doc
7.發布人名稱：武漢生物制品研究所有限責任公司
7.1聯系地址：武漢市江夏區黃金工業園路一號
7.2聯系人：吳德鑫 汪 洋
聯系電話：027-86637028
報名郵箱：wangyang16@sinopharm.com